選擇熒光定量pcr儀時(shí)應(yīng)關(guān)注的四個(gè)方面
發(fā)布時(shí)間：2019-05-08 閱讀：1452次
熒光定量pcr儀的出現(xiàn)，大地簡(jiǎn)化了定量檢測(cè)的過(guò)程，而且真正實(shí)現(xiàn)了定量。多種檢測(cè)系統(tǒng)的出現(xiàn)，使實(shí)驗(yàn)的選擇性強(qiáng)。自動(dòng)化操作提高了工作效率，反應(yīng)快速、重復(fù)性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果清晰。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合，熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測(cè)及其他各個(gè)領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將加廣闊，令人欣喜。那么想要選擇一款適合自己需求的熒光定量PCR儀時(shí)我們又該關(guān)注些什么呢？
選擇熒光定量pcr儀時(shí)應(yīng)關(guān)注的四個(gè)方面：
1、 靈活性
大規(guī)模繁忙的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備固然讓人羨慕，但是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室同樣可以有精彩的選擇。現(xiàn)在的儀器供應(yīng)商擁有眾多技術(shù)，有的還能提供整個(gè)分子生物學(xué)的基礎(chǔ)研究平臺(tái)，不但了解、滿足您現(xiàn)在的需求，而且還考慮到了你可能變化的需求——升級(jí)和換模塊。
2、 硬件設(shè)計(jì)特點(diǎn)
熒光定量PCR儀主要有傳統(tǒng)的96孔板式、創(chuàng)新的離心式等，每種設(shè)計(jì)都有它的獨(dú)到之處但也都有無(wú)法避免的缺憾。
傳統(tǒng)的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大，而且無(wú)需特殊的耗材。有些傳統(tǒng)的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測(cè)，這些光學(xué)結(jié)構(gòu)在96孔板的頂部，每個(gè)樣品孔距光源和檢測(cè)器的光程各不相同——邊緣效應(yīng)，對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。為了保證、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這類(lèi)儀器在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中通常會(huì)使用ROX（一種熒光染料）或?qū)Ｓ玫腞eference dye作為參照校正實(shí)驗(yàn)結(jié)果。鹵鎢燈的使用壽命短、換成本較高已經(jīng)成為很多用戶(hù)頭痛的問(wèn)題。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中鹵鎢燈作為一種熱光源，產(chǎn)生較多熱能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響。CCD大的優(yōu)點(diǎn)就是可以同時(shí)掃描所有樣品中的熒光信號(hào)，但是靈敏度較低，而且同時(shí)檢測(cè)樣品間的熒光信號(hào)存在干擾。
創(chuàng)新的離心式的儀器通常選用LED激發(fā)、PMT檢測(cè)，離心式的設(shè)計(jì)上避免了邊緣效應(yīng)。LED光源是冷光源對(duì)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有影響，因此無(wú)需采用其他熒光染料校正儀器，而且使用壽命長(zhǎng)無(wú)需經(jīng)常換。PMT每次只能收集單個(gè)熒光信號(hào)，但是檢測(cè)靈敏度高。但這類(lèi)儀器運(yùn)行速度非常快，但也存在樣本量小、耗材昂貴、沒(méi)有梯度功能、存在時(shí)間積分等缺點(diǎn)。
隨著熒光定量PCR技術(shù)的使用，聰明的儀器生產(chǎn)商紛紛在傳統(tǒng)的96孔板儀器上大作改進(jìn)。在檢測(cè)上突破了使用CCD改用PMT檢測(cè)熒光信號(hào)，大大提高了實(shí)驗(yàn)的靈敏度，但激發(fā)光源仍然沿用傳統(tǒng)的鹵鎢燈并且沒(méi)有梯度功能。
3、 儀器的檢測(cè)通量
在購(gòu)買(mǎi)定量PCR儀的時(shí)候要根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)的需要來(lái)選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測(cè)通量小到16個(gè)多到384個(gè)。如果進(jìn)行一般的基因表達(dá)研究或病原體檢測(cè)，實(shí)在不必購(gòu)買(mǎi)昂貴的儀器，96孔的通量足夠用；需要尋找要新藥靶點(diǎn)和疾病標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)室可以考慮購(gòu)買(mǎi)384孔板的儀器。假如經(jīng)費(fèi)有限無(wú)法購(gòu)買(mǎi)384孔板儀器的實(shí)驗(yàn)室，可以考慮購(gòu)買(mǎi)運(yùn)行速度快（帶有FAST模塊）的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器，你會(huì)發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、多樣本的PCR體系構(gòu)建成為限制實(shí)驗(yàn)速度和結(jié)果的頸瓶。
4、 運(yùn)行速度
在熒光定量PCR儀的眾多技術(shù)參數(shù)中，升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標(biāo)。快的升降溫，可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時(shí)間，提高PCR的特異性。為了好的完成實(shí)驗(yàn)，各個(gè)廠家紛紛推出能快速運(yùn)行的熒光定量PCR儀。
選擇熒光定量pcr儀時(shí)應(yīng)關(guān)注的四個(gè)方面：
1、 靈活性
大規(guī)模繁忙的實(shí)驗(yàn)室設(shè)備固然讓人羨慕，但是常規(guī)實(shí)驗(yàn)室同樣可以有精彩的選擇。現(xiàn)在的儀器供應(yīng)商擁有眾多技術(shù)，有的還能提供整個(gè)分子生物學(xué)的基礎(chǔ)研究平臺(tái)，不但了解、滿足您現(xiàn)在的需求，而且還考慮到了你可能變化的需求——升級(jí)和換模塊。
2、 硬件設(shè)計(jì)特點(diǎn)
熒光定量PCR儀主要有傳統(tǒng)的96孔板式、創(chuàng)新的離心式等，每種設(shè)計(jì)都有它的獨(dú)到之處但也都有無(wú)法避免的缺憾。
傳統(tǒng)的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大，而且無(wú)需特殊的耗材。有些傳統(tǒng)的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發(fā)、CCD檢測(cè)，這些光學(xué)結(jié)構(gòu)在96孔板的頂部，每個(gè)樣品孔距光源和檢測(cè)器的光程各不相同——邊緣效應(yīng)，對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。為了保證、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，這類(lèi)儀器在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中通常會(huì)使用ROX（一種熒光染料）或?qū)Ｓ玫腞eference dye作為參照校正實(shí)驗(yàn)結(jié)果。鹵鎢燈的使用壽命短、換成本較高已經(jīng)成為很多用戶(hù)頭痛的問(wèn)題。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中鹵鎢燈作為一種熱光源，產(chǎn)生較多熱能對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定的影響。CCD大的優(yōu)點(diǎn)就是可以同時(shí)掃描所有樣品中的熒光信號(hào)，但是靈敏度較低，而且同時(shí)檢測(cè)樣品間的熒光信號(hào)存在干擾。
創(chuàng)新的離心式的儀器通常選用LED激發(fā)、PMT檢測(cè)，離心式的設(shè)計(jì)上避免了邊緣效應(yīng)。LED光源是冷光源對(duì)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有影響，因此無(wú)需采用其他熒光染料校正儀器，而且使用壽命長(zhǎng)無(wú)需經(jīng)常換。PMT每次只能收集單個(gè)熒光信號(hào)，但是檢測(cè)靈敏度高。但這類(lèi)儀器運(yùn)行速度非常快，但也存在樣本量小、耗材昂貴、沒(méi)有梯度功能、存在時(shí)間積分等缺點(diǎn)。
隨著熒光定量PCR技術(shù)的使用，聰明的儀器生產(chǎn)商紛紛在傳統(tǒng)的96孔板儀器上大作改進(jìn)。在檢測(cè)上突破了使用CCD改用PMT檢測(cè)熒光信號(hào)，大大提高了實(shí)驗(yàn)的靈敏度，但激發(fā)光源仍然沿用傳統(tǒng)的鹵鎢燈并且沒(méi)有梯度功能。
3、 儀器的檢測(cè)通量
在購(gòu)買(mǎi)定量PCR儀的時(shí)候要根據(jù)實(shí)驗(yàn)實(shí)的需要來(lái)選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測(cè)通量小到16個(gè)多到384個(gè)。如果進(jìn)行一般的基因表達(dá)研究或病原體檢測(cè)，實(shí)在不必購(gòu)買(mǎi)昂貴的儀器，96孔的通量足夠用；需要尋找要新藥靶點(diǎn)和疾病標(biāo)記的實(shí)驗(yàn)室可以考慮購(gòu)買(mǎi)384孔板的儀器。假如經(jīng)費(fèi)有限無(wú)法購(gòu)買(mǎi)384孔板儀器的實(shí)驗(yàn)室，可以考慮購(gòu)買(mǎi)運(yùn)行速度快（帶有FAST模塊）的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器，你會(huì)發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、多樣本的PCR體系構(gòu)建成為限制實(shí)驗(yàn)速度和結(jié)果的頸瓶。
4、 運(yùn)行速度
在熒光定量PCR儀的眾多技術(shù)參數(shù)中，升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標(biāo)。快的升降溫，可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間，而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時(shí)間，提高PCR的特異性。為了好的完成實(shí)驗(yàn)，各個(gè)廠家紛紛推出能快速運(yùn)行的熒光定量PCR儀。
